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          首頁 > 技術與支持 > 液相色譜使用過程中的常見問題及解決方法
          液相色譜使用過程中的常見問題及解決方法
          點擊次數:1244 發布時間:2014-06-19
          液相色譜使用過程中的常見問題及解決方法:
           
          液相色譜技術,HPLC 是近期發展起來的一種具有高靈敏度、高選擇性的快速分離、分析技術.它既能用于微量組分的分析測定,又能用于大量的制備分離,靈活多樣,應用范圍已超過其它各種分離方法。如果HPLC使用人員能在分析樣品之時就熟悉常見的問題并加以解決,就能避免許多麻煩,讓您在HPLC使用過程中輕松應對。
           
          1 液相色譜儀系統
          液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數據處理系統組成(見圖1)。對于整個系統而言,柱子、泵和檢測器是核心部件,同時也是易出問題的主要部位。
           
          液相色譜儀常見問題及解決方法
          液相色譜儀作為一種高精密儀器,如果在使用過程中操作不當的話,就容易導致一些問題,其中zui常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰形異常問題。

          2.1 柱壓問題
          柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方,柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓穩定并不是指壓力值穩定于一個恒定值,而是指壓力波動范圍在345kPa以內(在使用梯度洗脫時,柱壓平穩、緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。

          2.1.1 壓力過高
          這是液相色譜儀在使用中zui常見的問題,指的是壓力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的情況。此時,我們應該分段進行檢查。
          ①首先斷開真空泵的入口處,此時PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法:用30%的硝酸浸泡0.5h,在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過濾頭正常,再檢查。②打開Purge閥,使流動相不經過柱子,如果壓力沒有明顯下降,則是過濾頭堵塞。處理方法:將過濾頭取出,用10%的異丙醇超聲30min。如果壓力降至690kPa以下,過濾頭正常,再檢查。③把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。處理方法:如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常;如果是一些強保留的物質導致堵塞,則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上,用流動相沖洗柱子。這時,如果柱壓仍不下降,只有換柱子入口篩板,但一旦操作不慎,很容易造成柱效下降,所以盡量少用。

          2.1.2 壓力過低
          壓力過低的現象一般是由于系統泄漏,處理方法:尋找各個接口處,特別是色譜柱兩端的接口,把泄漏的地方旋緊即可。當然還有一個原因就是泵里進了空氣,但此時表現的往往是壓力不穩,忽高忽低,更嚴重一點會導致泵無法吸進液體。處理方法:打開Purge閥,用3~5ml/min的流速沖洗,如果不行,則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

          2.2 漂移問題
          主要包括基線漂移和保留時間漂移。

          2.2.1 基線漂移
          一般說來,機器剛啟動時,基線容易漂移,大概要30min的平衡時間,如果用了緩沖溶液或緩沖鹽,還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長,但如果在實驗過程中發現基線漂移,則要考慮下面的原因(見表1)。
           
          2.2.2 保留時間漂移
          保留時間重現是液相性能好壞的一個重要標志,同一種東西,兩次的保留時間相差不要超過15s,超過了30s可看做保留時間漂移,就無法進行定性,要考慮以下原因(見表2)。
           
          2.3 峰形異常問題  
          峰形問題是液相的主要問題,在做液相過程中,我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰形,對于各種各樣的異常峰,要區別對待
           
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