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          首頁 > 技術與支持 > 延長色譜柱使用壽命的方法
          延長色譜柱使用壽命的方法
          點擊次數:2766 發布時間:2009-03-16

                色譜柱的使用壽命,除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關系外,zui主要的是與日常的委會密切相關。為延長色譜柱的使用壽命,維護您的利益,請仔細閱讀此部分。
          色譜柱的使用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個指標來衡量,如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高,通常被認為該色譜柱已經結束。因此,延長色譜柱使用壽命的關鍵是,消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。以下是色譜柱的日常維護方法:
          一、流動相的PH應在使用的范圍內
              Welch公司的色譜柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外,其反相色譜柱的PH范圍均為1.5-10,由于填料中存在Si-C和Si-O鍵,流動相超過其PH范圍將會導致硅膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,使用壽命變短。由于流動相的PH 控制不當而對色譜柱造成的損害,通常很難是色譜柱恢復,因此必須認真對待,嚴格控制流動相的PH值。
          二、去除樣品和流動相中的固體顆粒
              樣品和流動相中含有的固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高,而且也會引起柱效下降,因為篩板的堵塞會引起液流不均,導致色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45μm濾膜。
          三、使用保護柱或在線過濾器
              樣品和流動相經過濾后并不能完全消除固體顆粒物質,因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產生固體顆粒物質,這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱,堵塞篩板,導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線過濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大 比例,因此,除對樣品和流動相進行過濾外,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。
              如果去人色譜柱柱壓升高是由于進樣端篩板被堵引起的,科選擇一下方式進行補救:
              1、先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
              2、先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器,然后反向使用。
          四、正確使用緩沖鹽
              緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時阻礙了基質上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
              正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
             1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。
             2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
             注意:過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,區別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
             3、緩沖鹽析出的補救方法:
             1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
             2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
          五、防止強保留物質在色譜柱上存留
              強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由于強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應,需要一定的時間才會體現出來,但對許多藥品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質,因此要防止強保留物質的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。
          清洗方法:
             1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
             2、使用過緩沖鹽:分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
             3、補救方法:
          水——乙氰——氯仿(或異丙醇)——乙氰——水
          每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。 

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